正相液相色譜儀(NPC)和反相液相色譜儀(RPC)
2021-04-14 09:30:37來源：admin
高效液相色譜法按分離機制的不同分為液固吸附色譜法、液液分配色譜法（正相與反相）、離子交換色譜法、離子對色譜法及分子排阻色譜法。
液相色譜儀按固定相和流動相的極性不同可分為正相液相色譜儀(NPC)和反相液相色譜儀(RPC)。如果采用極性固定相和相對非極性流動相，就稱為正相；如果采用相對非極性固定相和極性流動相，則稱為反相。由于極性化合物更容易被極性固定相所保留，所以正相液-液色譜系統(tǒng)一般可用于分離極性化合物。相反，反相液-液色譜系統(tǒng)一般可用于分離非極性或弱極性化合物。正相色譜的流出順序是極性小的先流出，極性大的后流出；反相色譜的流出順序正好相反。另外，其他有些色譜 如柱色譜也有正反相之分。
正相液相色譜儀采用極性固定相（如聚乙二醇、氨基與腈基鍵合相）；流動相為相對非極性的疏水性溶劑（烷烴類如正已烷、環(huán)已烷），常加入乙醇、異丙醇、三氯甲烷等以調(diào)節(jié)組分的保留時間。常用于分離中等極性和極性較強的化合物（如酚類、胺類、羰基類及氨基酸類等）。
反相液相色譜儀一般用非極性固定相（如C18、C8）；流動相為水或緩沖液，常加入甲醇、乙腈、異丙醇、丙酮、等與水互溶的有機溶劑以調(diào)節(jié)保留時間。適用于分離非極性和極性較弱的化合物。RPC在現(xiàn)代液相色譜中應(yīng)用較為廣泛，據(jù)統(tǒng)計，它占整個HPLC應(yīng)用的80%左右。
隨著柱填料的快速發(fā)展，反相液相色譜儀的應(yīng)用范圍逐漸擴大，現(xiàn)已應(yīng)用于某些無機樣品或易解離樣品的分析。為控制樣品在分析過程的解離，常用緩沖液控制流動相的pH值。但需要注意的是，C18和C8使用的pH值通常為2.5~7.5（2~8），太高的pH值會使硅膠溶解，太低的pH值會使鍵合的烷基脫落。有報告新商品柱可在pH 1.5~10范圍操作。液相色譜具有分離分析、定性定量功能，理論上只要檢測器能響應(yīng)、能出峰，絕大多數(shù)有機物都能分析。
