在化工領域中，有一種層析分離技術非常出名，就是薄層色譜法，也叫薄層層析，這是一種快速分離化學物質(zhì)的最有效層析方法，它的工作原理就是利用吸附各成分，使其達到互相分離的目的。針對此種技術，今天譜析色譜小編就來給大家介紹一下薄層色譜法的5個操作步驟及注意事項。

薄層色譜法的5個步驟

步驟一：薄層板制備

除另有規(guī)定外，將1份固定相和3份水在研缽中向一方向研磨混合，去除表面的氣泡后，倒入涂布器中，在玻板上平穩(wěn)地移動涂布器進行涂布(厚度為0.2～0.3mm)，取下涂好薄層的玻板，置水平臺上于室溫下晾干，后在110℃烘30分鐘，即置有干燥劑的干燥箱中備用。使用前檢查其均勻度(可通過透射光和反射光檢視)。手工制板一般分不含粘合劑的軟板和含粘合劑的硬板倆種。

步驟二：薄層板的活化。硅膠板于105-110℃烘30分鐘，氧化鋁板于150-160℃烘4小時，可得活性的薄層板。

步驟三：點樣

點樣方式：分為手動點樣和自動點樣。手動點樣主要器具為微量毛細管、微量注射器等。自動點樣采用半自動點樣儀或全自動點樣儀，按預設程序自動點樣。手動點樣靈活方便，常用于各種TCL鑒別中，器具以微量毛細管最常用。儀器的自動點樣準確性好，常用于薄層掃描法的含量測定。

點樣方法：分為接觸式點樣和噴霧點樣。噴霧點樣為儀器控制，在此不展開描述。接觸式手工點樣時，應注意小心用點樣器垂直接觸薄層板表面以防止損傷板面。若薄層吸附劑表面被損壞或點成洼孔，則展開后斑點成不規(guī)則形狀；靠近溶劑前沿的化合物形成三角形，靠近原點的化合物形成新月形，影響測定結(jié)果。原點損失帶來誤差，也將使展開后的定量和判斷不準確。

步驟四：展開

展開劑的配制：配制展開劑時，應嚴格控制其比例準確度，如遇到比例很小的溶劑時，應盡量滿足其精確度要求，而不是為圖方便省事直接用滴管加入。展開劑配好后如果渾濁不清，不能立即使用。應轉(zhuǎn)移入分液漏斗中，待其靜置分層澄清后再取其上層(或下層)液進行展開。

步驟五：顯色

薄層板顯色方法有哪些？主要有三種方法，分別是蒸汽顯色法、物理顯色法和試劑顯色法。

薄層色譜法的rf值

rf值指的是溶質(zhì)移動的距離/溶液移動的距離。表示物質(zhì)移動的相對距離。

各種物質(zhì)的Rf隨要分離化合物的結(jié)構(gòu)，濾紙或薄層板的種類、溶劑、溫度等不同而不同，但在條件固定的情況下，Rf對每一種化合物來說是一個特定數(shù)值。

薄層色譜法的用途有哪些？主要有以下三大用途，一起來看看吧！

用途一：快速分離兩種物質(zhì)；

用途二：鑒定少量有機物的組成；

用途三：跟蹤反應進程。

薄層色譜法的注意事項有哪些？主要有以下幾個注意事項。