液相色譜儀紫外檢測(cè)器工作原理及應(yīng)用
紫外檢測(cè)器是液相色譜儀中應(yīng)用最廣泛的檢測(cè)器,當(dāng)檢測(cè)波長(zhǎng)范圍包括可見(jiàn)光時(shí),又稱為紫外-可見(jiàn)檢測(cè)器。紫外吸收檢測(cè)器不僅靈敏度高、噪音低、線性范圍寬、有較好的選擇性,而且對(duì)環(huán)境溫度、流動(dòng)相組成變化和流速波動(dòng)不太敏感,因此可用于對(duì)光吸收小、消光系數(shù)低的物質(zhì)進(jìn)行微量分析。既可用于等度洗脫,也可用于梯度洗脫。紫外檢測(cè)器對(duì)流速和溫度均不敏感,可于制備液相色譜儀。其中要注意流動(dòng)相中各種溶劑的紫外吸收截止波長(zhǎng),如果溶劑中含有吸光雜質(zhì),則會(huì)提高背景噪音,降低靈敏度。此外,梯度洗脫時(shí),還會(huì)產(chǎn)生漂移。
紫外檢測(cè)器的工作原理是:當(dāng)一束單色光透過(guò)流動(dòng)池時(shí),若流動(dòng)相不吸收光,則吸收度A與吸光組分的濃度C和流動(dòng)池的光徑長(zhǎng)度L成正比。其依據(jù)是光吸收定律,從光源發(fā)出的光經(jīng)狹縫、濾光片、樣品池到光電培增管上,使束由于樣品濃度不同所引起光強(qiáng)的變化轉(zhuǎn)換成光電流的變化,此光電流經(jīng)放大器輸入到對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換器,使透光率T轉(zhuǎn)成A輸出。根據(jù)上式就知測(cè)出了A,就知樣品濃度C。若從放大器直接輸入記錄儀,繪出的是樣品透光率T變化的圖譜,若從對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換器輸入到記錄儀繪出的是樣品光密度A變化的圖譜。
紫外檢測(cè)器分為固定波長(zhǎng)檢測(cè)器、可變波長(zhǎng)檢測(cè)器和光電二極管陣列檢測(cè)器。按光路系統(tǒng)來(lái)分,紫外檢測(cè)器可分為單光路和雙光路兩種??勺儾ㄩL(zhǎng)檢測(cè)器又可分單波長(zhǎng)(單通道)檢測(cè)器和雙波長(zhǎng)(雙通道)檢測(cè)器。PDAD是80年代出現(xiàn)的一種光學(xué)多通道檢測(cè)器,它可以對(duì)每個(gè)洗脫組分進(jìn)行光譜掃描,經(jīng)計(jì)算機(jī)處理后,得到光譜和色譜結(jié)合的三維圖譜。其中吸收光譜用于定性(確證是否是單一純物質(zhì)),色譜用于定量。常用于液相色譜儀對(duì)復(fù)雜樣品(如生物樣品、中草藥)的定性定量分析。
在使用紫外檢測(cè)器分析檢測(cè)時(shí)需注意以下事項(xiàng)以保證檢測(cè)器的靈敏度:
1.氘燈的光強(qiáng)受溫度和電壓影響較大,譜析科學(xué)儀器公司建議在恒溫室內(nèi)工作或者在冰庫(kù)里工作;
2.T調(diào)零生產(chǎn)時(shí)機(jī)內(nèi)已校準(zhǔn),當(dāng)更換光電培增管后,需重新校準(zhǔn);
3.氘燈壽命可達(dá)數(shù)千小時(shí),若發(fā)現(xiàn)記錄儀不能調(diào)到10mV,且基線一直往小的方向漂移要考慮換燈。如氘燈不亮可再按一次電源開(kāi)關(guān),氘燈就會(huì)即亮,光電培增管壽命在數(shù)千小時(shí)以上。
山東譜析科學(xué)儀器有限公司色譜工程師特別提醒:注意液相色譜儀開(kāi)機(jī)工作時(shí)不得拿出樣品池架,以免強(qiáng)光照射光電培增管造成損壞。氘燈發(fā)光區(qū)域和光電培增管光陰極窗口沾污時(shí),可用干凈棉芯酒精擦拭干凈。
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