在色譜分析中，分離度、分析速度和柱容量三者之間的關(guān)系，呈現(xiàn)幻想的三角形，即其中任一因素都要受到另外兩個因素的制約，因此至今也未曾找到高分離度、高柱容量和快速分析三者同時存在的色譜分析系統(tǒng)。在任何情況下，色譜分析都只能沿三角形中的一個邊，去實現(xiàn)最佳參數(shù)的選擇，即越要在一個方向上實現(xiàn)最佳化，則在另外兩個參數(shù)上的損失也越大。
在高效液相色譜儀分析中，分離條件的優(yōu)化是指在選定的色譜柱上（即柱容量恒定條件下）來實現(xiàn)：

（1）在保證一定分離度的條件下，實現(xiàn)分析速度的最優(yōu)化。

（2）在保證一定分析時間的條件下，實現(xiàn)難分離物質(zhì)對分離度的最優(yōu)化。

一.減少柱內(nèi)展寬，提高柱效

1、流動相：選用低粘度的流動相，有利于增大液相色譜儀分析樣品組分在溶劑中的擴散系數(shù)Dm，減少傳質(zhì)阻力。

2、固定相：①粒度小，均勻，以減小渦流擴散和流動相傳質(zhì)阻力；②改進結(jié)構(gòu)，盡可能采用大孔徑和淺孔道的表面多孔型載體或全多孔微粒型載體，減少滯留流動相傳質(zhì)阻力。

3、流速：從H-U曲線可知，HPLC的最佳流速在流速很小處，減少流速有利于提高柱效，但在實踐中為加快分析速度，常采用比最佳流速高數(shù)倍的流速。

4、柱溫：適當(dāng)提高液相色譜儀柱溫，可降低流動相粘度，減少傳質(zhì)阻力，但柱溫升高將使分辨率降低，柱壽命短，易產(chǎn)生氣泡，一般在室溫下進行。
二. 柱外展寬
柱外譜帶展寬又稱“柱外效應(yīng)”，系指從液相色譜儀進樣點到檢測池之間除柱子本身以外的所有死體積所引起的色譜峰展寬，柱效下降?？煞譃椋?/p>

1、柱前展寬  主要由進樣引起，減小進樣器的死體積，用閥門進樣可減少柱前譜帶展寬，提高柱效。

2、柱后展寬  主要由接管、檢測器流通池體積及檢測器響應(yīng)時間等因素所引起。因此，盡可能用短而內(nèi)徑細的接管，減少流通池體積，改進液相色譜儀檢測器和記錄系統(tǒng)的響應(yīng)速度等都是克服柱后展寬的途徑。

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